Иммуноферментный анализ (ИФА) - это лабораторные исследования, основанные на высокой избирательности и специфичности иммунологической реакции "антиген-антитело". Существует не один десяток разновидностей такого анализа, однако наиболее популярным является гетерогенный твердофазный иммунный анализ или ELISA (enzyme linked immunosorbent assay).
С помощью иммуноферментного анализа можно выявить у человека наличие антигенов возбудителя какой-либо инфекции, либо для установления присутствия антител класса IgA, IgM, IgG к антигену возбудителя болезни. Кроме того, можно выявить появившиеся иммунные комплексы. ИФА является важным диагностическим методом не только инфицирования организма, но и определения аллергологического, гормонального статуса, гельминтозного поражения.
Иммуноферментный анализ является достаточно сложным методом исследования. Последовательность всех этапов его выполнения в первую очередь зависит от вида исследования. Однако принцип исследования заключается в следующем:
• Утром натощак у пациента производится забор крови. Из которой затем отбирается сыворотка, содержащая антитела.
• Есть готовые наборы антигенов, которыми могут быть любые вещества, способные вызывать ответную реакцию организма (гормоны, бактерии, гельминты, аллергены).
• Далее сыворотку вносят в лунки с антигеном, после чего происходит связывание антигена с антителом.
• Остаётся только определить количество прореагировавших антител.
Как видно из названия, иммуноферментный анализ состоит из двух частей – иммунной и ферментативной реакций. Иммунная реакция направлена на связывание элементов клетки, биологических молекул, микроорганизмов, которые необходимо обнаружить. То есть происходит связывание антигена с антителом, результатом чего является образование иммунного комплекса. А с помощью ферментной реакции можно качественно определить и измерить результат иммунологической реакции. Она основана на превращении под воздействием фермента одного вещества (субстрата) в другое (продукт реакции). Причём один фермент может воздействовать на строго определённый субстрат, т.е. обладает очень высоким сродством.
Как известно, существует великое множество различных ферментов, однако для ИФА используются не более десяти, поскольку продуктом реакции обязательно должно являться окрашенное вещество. Это делается потому, что для количественной интерпретации полученных результатов используется колориметрический метод, основанный на вычислении концентрации определяемого вещества по оптической плотности. Причём возможна как прямая, так и обратная зависимость концентрации от окраски вещества.
На практике происходит так: с помощью калибровочных растворов, концентрация которых заранее известна, строится график зависимости оптической плотности от концентрации вещества. Далее измеряют оптическую плотность искомого раствора и по графику находят его концентрацию. Полученные значения сравниваются с нормативами, на основании чего готовится заключение.
Для проверки правильности измерения в наборах некоторых производителей есть контрольный образец с известной концентрацией.
Автор статьи:
Анна Романюк
Ответственная за работу лабораторного сектора СМУ, научный сотрудник группы гормональных исследований Научно-исследовательской лаборатории БелМАПО.
Google+